Testosteron wird beim Mann vor allem in den Hoden synthetisiert, kleinere Mengen auch in den Nebennieren. Mit zunehmendem Alter geht die Testosteronproduktion kontinuierlich zurück. Frauen produzieren geringe Mengen in den Eierstöcken und ebenfalls in den Nebennieren. Ausgangsstoff für die Synthese von Testosteron ist Cholesterin.